生物化学与分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门学科,是生命科学的前沿学科,掌握其基本理论及实验已成为探讨疾病的分子机制和防治方法,甚至认识生命现象的必要手段。《生物化学与分子生物学实验教程》包括三章,第一章是实验室规章制度和实验记录、实验报告,第二章介绍了实验室常用仪器设备、常用试剂及常用实验技术,第三章为具体实验内容,分为基础性实验、融合性实验和创新性实验三大类:基础性实验注重培养学生基本的实验操作能力,使其熟悉生物化学与分子生物学常见的实验方法和手段;融合性实验主要结合学科的不同特色,培养学生综合分析和解决问题的能力;创新性实验主要根据学科的新发展,启发学生开拓思路,并提出解决问题的方案,重点培养学生的独立思考和创新能力。
《生物化学与分子生物学实验教程》适合医学院校学生使用,也可作为生物化学与分子生物学相关研究人员的参考用书。
高等院校教育改革如火如荼,尤其是对创新创业能力的提升有了新的要求。实验教学是创新型人才培养的重要环节。各个院校的实验教学有各自的特点,目前普遍倾向于实验课程独立开课,逐步摆脱实验课程完全依赖于理论教学的传统模式。院校间的相互学习和交流也是非常必要的。在上述背景下,编者联合了四川大学华西基础医学与法医学院、西南医科大学基础医学院及昆明医科大学基础医学院的多位长期坚守在生物化学与分子生物学理论和实验教学一线的老师(主要是年轻教师),共同编写了本教材。
本教材在内容编写方面,除包括了原有的生物化学与分子生物学课程的主要基础性实验外,还设计了一些融合性实验和创新性实验,目的是让学生通过实验掌握较全面的实验技能,同时能够将各学科的知识贯通起来。此外,从多个角度分层次地展现教学内容,使教学形式活泼生动,教学内容形象直观,学生容易理解相关知识,进而调动学生学习的积极性和主动性,激发学生的创造性思维。这是我们所做出的努力和尝试,希望能取得一定的效果。编者的最终目的是把生物化学与分子生物学实验教学工作做好,努力为培养适应社会发展需要的人才尽绵薄之力。
教材的编写,实际上是给了编者一次机会,以吸取前人的精华.总结实验教学中的经验教训,改正不足。但由于编者水平有限,书中难免存在不足之处,恳请广大读者及同行学者提出宝贵意见,以便及时修正,不胜感激。
前言
第一章 实验室规章制度和实验记录、实验报告
一、实验室规章制度
二、实验室安全及防护
三、实验记录和实验报告
(一)实验记录
(二)实验报告
四、生物化学与分子生物学实验的绘图要求、方法及实验数据处理分析方法
(一)实验报告中的图表
(二)实验数据的处理与分析
第二章 实验室常用仪器设备、常用试剂及常用实验技术
一、实验室常用玻璃仪器的介绍
(一)常用玻璃仪器
(二)常用玻璃仪器的洗涤
二、常用试剂的配制、缓冲溶液与缓冲体系的介绍
(一)常用试剂配制要点
(二)实验试剂的使用
(三)溶液浓度
(四)缓冲溶液
三、离心技术
(一)离心中常用概念
(二)离心方法
(三)离心机的构造
(四)离心机的分类
(五)离心机使用注意事项
四、分光光度技术
(一)原理
(二)分光光度计的基本结构
(三)分光光度计的应用
(四)分光光度计的常用类型
(五)分光光度计的使用
五、层析技术
(一)层析原理
(二)层析分类
(三)主要的层析技术
六、电泳技术
(一)电泳的基本原理
(二)影响电泳的因素
(三)电泳的分类
(四)常用的电泳技术
七、PCR技术
(一)PCR技术的基本原理
(二)PCR技术操作要素
(三)PCR技术所需仪器设备
(四)各种PCR技术的变体
八、细胞培养技术
(一)设施器材及培养基
(二)细胞培养常规操作
(三)细胞培养具体流程
(四)注意事项
(五)细胞培养方式
(六)细胞培养存在的不足
九、其他常规仪器设备的使用
(一)移液器
(二)酶标仪
(三)水浴锅
第三章 实验项目
第一节 基础性实验项目
一、蛋白质定量分析实验
实验一 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量
实验二 BcA法测定蛋白质含量
实验三 Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量
实验四 紫外分光光度法测定蛋白质含量
二、层析分离纯化实验
实验五 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定
实验六 血清脂质的薄层层析
三、电泳实验
实验七 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳及定量分析
实验八 心、肝、肾组织乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离
实验九 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
实验十 SDS—PAGE测定蛋白质相对分子质量
四、酶学实验
实验十一 碱性磷酸酶的分离、纯化与比活性测定
实验十二 酶促反应动力学实验
实验十三 MMP-2和MMP-9表达的明胶酶潜分析
五、物质代谢实验
实验十四 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
实验十五 肝糖原的提取与鉴定
六、分子生物学实验
实验十六 组织细胞基因组DNA的提取
实验十七 质粒DNA的提取、定量、电泳与酶切鉴定
实验十八 核酸含量的测定
实验十九 PCR扩增目的基因
实验二十 DNA琼脂糖凝胶电泳及限制性内切核酸酶酶谱分析
第二节 融合性实验项目
一、免疫生化技术
实验二十一 凝集反应
实验二十二 沉淀反应
实验二十三 免疫扩散和免疫电泳
实验二十四 酶联免疫吸附实验
实验二十五 免疫胶体金实验
二、分子生物学、细胞生物学、生物化学整合实验
实验二十六 培养细胞或组织总RNA的提取及RT-PCR扩增目的基因
实验二十七 培养细胞绿色荧光蛋白基因转染及荧光显微镜检测表达效率
实验二十八 蛋白质印迹(Westernblot)实验
第三节 创新性实验项目
实验二十九 基因克隆与重组表达质粒的构建
实验三十 基因重组表达质粒在原核细胞中的表达、纯化与鉴定
实验三十一 基因重组表达质粒在真核细胞中的表达与检测
实验三十二 免疫酶组织(细胞)化学技术
实验三十三 免疫荧光细胞化学技术
参考文献
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