《生物化学与分子生物学实验教程》为适应高等医学院校的实验教学改革和发展需要而编写。分为生化与分子生物学实验（包括基础性实验、综合性实验和创新设计实验）与生化与分子生物学基本技术两篇。在实验项目的设置上，除了蛋白质、核酸的分离纯化分析、酶学、糖类、脂类分析等基础实验外，大部分的综合性实验和创新设计实验则是来源于教师们的科研项目。在实验的基础理论方面，增加了近年来常用的RNA干扰等较新的技术。每一篇有英文小结，附录中有常用仪器、技术等中英文词汇对照表。《生物化学与分子生物学实验教程》内容较新颖，体系较完整，不同层次实验的培养目标有所侧重，便于基础医学等专业不同层次学生选择。

前言
第一篇生物化学与分子生物学实验
第一章基础性实验
实验1 蛋白质的呈色反应、沉淀现象观察及等电点的测定
实验2蛋白质含量的测定
实验3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
实验4红细胞葡糖—6—磷酸脱氢酶活性测定
实验5血清丙氨酸转氨酶活性测定（紫外速率法及改良穆氏法）
实验6糖化血红蛋白的测定
实验7血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
实验8血红蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
实验9血糖测定
实验10胰岛素、肾上腺素对家兔血糖浓度的影响
实验11 血清总胆固醇测定
实验12质粒DNA的提取、酶切与鉴定
实验13酵母RNA的成分鉴定
实验14 PCR扩增G6PD基因外显子11—12片段
实验15尿中酮体的检出
实验16血清尿素氮测定（二乙酰—肟法）
第二章综合性实验
实验17真核细胞基因组DNA的提取、定量和纯度测定
实验18小鼠基因组DNA的Southern blotting分析
实验19小鼠脑组织总RNA提取与RT—PCR获取真核基因片段
实验20 pMD19一G6PD重组子的蓝白斑筛选及酶切鉴定
实验21 pThioHis（A）—G6PD重组表达质粒的鉴定
实验22 G6PD重组酶的诱导表达、分离及比活性测定
实验23 ATP、ADP和NADPH对G6PD酶促反应的影响
实验24小鼠PKCe基因的克隆、鉴定及其6His融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化
实验25 SDS—PAGE测定蛋白质的表观分子量
实验26小鼠血清IgG的Western blotting分析
实验27血红蛋白的等电聚焦分离及其等电点测定
实验28醋酸纤维薄膜电泳技术分离乳酸脱氢酶同工酶
实验29血清蛋白的盐析及清蛋白／球蛋白的测定
实验30血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳分离及定量测定
实验31 酶的特异性及温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响
实验32小鼠肝细胞核的分离、纯化与鉴定
实验33动脉硬化指数的计算
实验34糖的硅胶G薄层层析分析鉴定
第三章创新设计实验
实验35 乙醛脱氢酶2基因型的检测
实验36针刺“足三里”穴位对家兔血糖浓度的双向调节作用
实验37小鼠PKCe相互作用蛋白质的捕获、鉴定
实验38小鼠肝总蛋白质的双向电泳分离
实验39人血浆同型半胱氨酸的测定（ELISA方法）
实验40 自毁容貌综合征的生化与分子生物学分析
实验41 G6PD缺陷的诊断及其发病的分子基础
实验42 HL—60细胞中DAPK基因甲基状态的检测
实验43胰岛素促进HepG2细胞对葡萄糖吸收的检测


第二篇生物化学与分子生物学技术
第四章分光光度技术
第一节分光光度技术的基本原理
……
参考文献
附录一生物化学与分子生物学常用数据库和软件
附录二生物化学与分子生物学常用试剂和培养基的配制方法
附录三生物化学及分子生物学实验常用缩略语
附录四生物化学与分子生物学实验常用词中英文对照

　获得的，是否能够识别其他种属来源的同一种蛋白质并与其结合。为了解这一问题，首先应该向提供抗体的厂家了解情况，其次是查文献了解是否有其他人成功应用的范例，再就是检索序列资料数据库，比较不同种属来源的相同种类蛋白质的相关多肽片段的氨基酸序列的相似程度。如果对某一抗体的不同种属的适用性情况无法了解，那就别无选择，须要先少量购买一些抗体，做一个预实验来确定该抗体的适用性。
　　选择抗体还需要注意的一点是，一般的抗目标蛋白抗体的种属来源应该与待分析蛋白质样品的种属来源不同。否则在应用二抗检测进行显示时，极易受蛋白质样品中存在的IgG干扰，影响结果的解释，尤其对微量蛋白质的检测极为不利，应该注意尽量避免这种情况的出现。
　　第二抗体的选择主要是针对第一抗体的种属来源和检测显示手段这两方面进行的，一般不需要再考虑其他方面。
　　2.过夜温浴的注意事项
　　如果需要过夜、长时间抗体温浴，需要防止杂菌大量繁殖。一般可以于4=C进行温浴，如果没有4℃温浴条件，可以在温浴液中加入防腐剂。对于待用辣根过氧化物酶标记二抗进行检测时，可以在温浴液中加防腐剂硫柳汞至终浓度为0.05％。
　　【思考题】
　　1.一般科研工作实践中，转印膜都需要进行染色和记录结果，并且与最终的Westernblotting结果进行对照。你认为这有必要吗？为什么？
　　2.蛋白质印迹分析能否用于直接检测未知蛋白质？为什么？
　　3.如果某一蛋白质的存在量足以用染色法直接显示，是否仍然会有必要应用操作较为烦琐的蛋白质印迹实验？为什么？
　　附：增强的化学发光显示方法
　　用增强的化学发光显示方法（enhanced chemiluminescence，ECL）进行酶标免疫检测比常用的呈色显示方法的检测灵敏度高100～1000倍甚至以上，现在国内外实验室已经将增强的化学发光显示方法作为蛋白质印迹分析的常规检测方法使用。此处介绍的增强的化学发光显示方法的所用试剂可以在市场上买到白行配制，与市场上可以购买到的成品增强的化学发光显示试剂相比，灵敏度上稍逊一筹，但是费用极为低廉，适合于一般实验室采用。但是须要注意，使用增强的化学发光显示方法的先决条件之一是需要有暗室可用。
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前言/序言
　　医学实验教学是医学教育的重要组成部分，是培养学生实践能力、科学思维和创新精神的主要途径，因此，提高医学实验教学质量将有助于提升整体医学教育水平。生物化学与分子生物学实验技术是当代医学研究的重要手段和方法，也是医学相关专业和各层次学生的必修实验课。为了适应高等医学院校实验教学改革和发展的需要，构建多层次、多模块的医学生物化学与分子生物学实验教学体系，我们编写了本教材。
　　本教材分为两篇，第一篇为生物化学与分子生物学实验，第二篇为生物化学与分子生物学技术。根据实验内容和要求，结合教学逻辑和规律，为满足不同层次学生的需求，将实验分为基础性实验、综合性实验和创新设计实验3个模块。基础性实验有助于巩固学生基本理论知识和培养学生基本实验操作技能；综合性实验多来源于教师的科研项目，应用了多种生物化学与分子生物学实验技术，经过多轮教学的实际检验，有利于培养学生的综合分析能力；创新设计实验从临床病例出发，通过设计实验方案，探讨疾病的生物化学与分子机制，培养学生的科研能力。
　　本教材注重实验的科学性与实用性相结合、知识传授与素质培养相结合、实验技术与临床应用相结合。为了便于学生自主学习，还介绍了生物化学与分子生物学常用软件和网络资源。此外，为配合双语教学的开展，附录中有本教材中使用的仪器、常用试剂、名词等的中英文对照。
　　各高等医学院校根据各专业各层次学生的培养目标和要求，可选择本教材中不同模块的实验项目实施实验教学。此外，本