《医学微生物学与免疫学实验教程/全国高等院校医学实验教学规划教材》包括医学微生物学实验与医学免疫学实验两部分。医学微生物学共八章,第一章到第五章为医学微生物学总论实验部分,介绍了医学微生物学常用技术、细菌的培养与保存方法、细菌的分布和代谢及影响因素、细菌的遗传变异、细菌的致病作用。第六章到第八章为医学微生物学各论实验部分,介绍了常见医学微生物相关的实验方法。医学免疫学部分介绍了免疫学常用技术、非特异性免疫功能检测、特异性体液和细胞免疫功能测定,免疫病理反应。《医学微生物学与免疫学实验教程/全国高等院校医学实验教学规划教材》内容不仅包括常用微生物学与免疫学技术,同时涵盖了部分分子生物学相关的实验内容,具有简明扼要、思路清晰、操作性强等特点。
《医学微生物学与免疫学实验教程/全国高等院校医学实验教学规划教材》可供基础、临床、预防口腔,护理等专业及医学相关专业学生参考使用。
前言
第一篇 医学微生物学实验
第一章 医学微生物学常用技术
第一节 显微镜的使用
第二节 细菌的基本形态及细菌的特殊结构
第三节 细菌不染色检查法
第四节 细菌涂片的制备
第五节 简单染色法
第六节 革兰染色法
第七节 细菌特殊结构的检查
第八节 细菌大小的测定
第九节 微生物计数
第二章 细菌的培养与保存方法
第一节 培养基的制备
第二节 细菌的分离与培养
第三节 细菌的倾注培养和平板菌落计数
第四节 细菌生长曲线的绘制
第五节 微生物菌种保藏方法
第三章 细菌的分布、代谢及影响因素
第一节 细菌的分布
第二节 细菌的生化反应
第三节 外界因素对细菌生长代谢影响
第四节 细菌耐药性的检测
第五节 噬菌体的特异性溶菌试验
第四章 细菌的遗传变异
第一节 细菌细胞壁缺陷型变异(L型变异)
第二节 鞭毛变异(H-O变异)
第三节 光滑型与粗糙型(S-R)菌落变异
第四节 细菌的R质粒结合传递
第五节 质粒DNA转化试验
第六节 细菌耐药性突变
第五章 细菌的致病作用
第一节 透明质酸酶扩散试验
第二节 外毒素对机体的毒性作用及抗毒素的中和作用
第三节 内毒素检测(鲎试验)
第四节 内毒素的致热作用(家兔发热试验)
第五节 大肠埃希菌肠毒素试验
第六节 荚膜的致病作用(肺炎双球菌小鼠毒力试验)
第六章 病原性球菌
第一节 病原性球菌的形态观察
第二节 病原性球菌血平板培养物的观察
第三节 脓汁标本的分离与鉴定
第四节 血浆凝固酶试验
第五节 细菌的触酶试验
第六节 内酰胺酶的检测
第七节 耐热核酸酶试验
第八节 葡萄球菌糖发酵试验
第九节 杆菌肽敏感试验
第十节 抗链球菌溶血素“O”抗体测定
第十一节 肺炎链球菌胆汁溶解试验
第十二节 肺炎双球菌小鼠毒力试验
第七章 肠道杆菌
第一节 粪便标本中肠道病原菌分离
第二节 粪便标本中肠道病原菌初步鉴定
第三节 肠道菌生化反应
第四节 血清学鉴定
第八章 结核杆菌
第一节 结核分枝杆菌培养
第二节 抗酸染色法
第三节 荧光素染色法
第四节 人体结核菌素试验
第五节 结核分枝杆菌毒力试验
第二篇 医学免疫学实验
第一章 免疫学常用技术
第一节 实验动物的基本操作技术
第二节 小鼠免疫器官解剖学观察
第三节 外周血单核细胞的分离
第四节 T细胞、B细胞分离技术
第五节 人外周血单核细胞来源树突状细胞的制备
第六节 小鼠腹腔巨噬细胞的分离
第七节 小鼠脾细胞的制备
第八节 抗原的制备
第九节 免疫血清的制备及效价的测定
第十节 抗体纯化技术
第十一节 醛化红细胞的制备
第十二节 免疫实验的动物模型的制备
第二章 非特异性免疫功能检测
第一节 小鼠血脑屏障观察
第二节 溶菌酶的溶菌作用
第三节 碳粒廓清实验
第四节 中性粒细胞吞噬功能的测定(小吞噬)
第五节 墨汁吞噬试验
第六节 中性粒细胞杀伤功能测定
第七节 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(大吞噬)
第八节 中性粒细胞移动功能检测
第九节 NK细胞活性测定
第十节 补体溶血试验
第十一节 血清总补体活性测定(CH50单位测定)
第三章 特异性体液免疫功能检测
第一节 凝集反应
第二节 沉淀反应
第三节 血清溶血素测定
第四节 体外抗体形成细胞测定
第五节 补体结合试验
第六节 中和实验
第四章 特异性细胞免疫功能检测
第一节 淋巴细胞增殖试验
第二节 花环法T细胞CD2分子的检测
第三节 白细胞移动抑制试验
第四节 混合淋巴细胞反应
第五节 脾脏B细胞增殖试验
第六节 CTL杀伤功能测定
第五章 免疫病理反应
第一节 豚鼠速发型过敏反应
第二节 青霉素过敏试验
第三节 免疫复合物型超敏反应-Arthus现象
第四节 豚鼠结核菌素试验
第五节 小鼠DNFB试验
第六节 小鼠DTH试验
第七节 植物血凝素皮肤试验
第八节 链激酶-链道酶皮肤试验
参考文献
附录一 医学微生物学与免疫学实验室规则
附录二 实验室常用器材的处理与消毒灭菌
附录三 常用培养基的配制
附录四 常用试剂的配制
《医学微生物学与免疫学实验教程/全国高等院校医学实验教学规划教材》:
(2)皮肤给药:为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等,均需采用经皮肤给药方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面积的皮肤脱毛后,将一定药液涂在皮肤上,药液经皮肤吸收。
(3)脊髓腔内给药:此法主要用于椎管麻醉或抽取脑脊液。家兔椎管内注射时,先将家兔做自然俯卧式,尽量使其尾向腹侧屈曲,用粗剪将第7腰椎周围背毛剪去,用3%碘酊消毒,干后再用79%乙醇溶液将碘酒擦去。在兔背部髌骨脊连线之中点稍下方摸到第7腰椎间隙(第7腰椎与第1骶骨椎之间),插入腰椎穿刺针头。当针到达椎管内时(蛛网膜下隙),可见到兔的后肢跳动,即证明穿刺针头已进入椎管。这时不要再向下刺,以免损伤脊髓。固定好针头,即可将药物注入。
(4)小脑延髓池给药:此种给药都是在动物麻醉情况下进行的。而且常采用大动物如狗等,小动物很少采用。将狗麻醉后,使狗头尽量向胸部屈曲,用左手摸到其第1颈椎上方的凹陷(枕骨大孔),固定位置,右手取7号钝针头(将针头尖端麻钝),由此凹陷的正中线上,顺平行狗的方向,小心地刺人小脑延髓池。当针头正确刺入小脑延髓池时,注射者会感到针头再向前穿时无阻力,同时可以听到很轻的“咔嚓”一声,即表示针头已穿过硬脑膜进入小脑延髓池,而且可抽出清亮的脑脊液,注射药物前,先抽出一些脑脊液,抽取量根据实验需要注入多少药液决定,即注入多少抽取多少,以保持原来脑脊髓腔里的压力。
(5)脑内给药:此法常用于微生物学动物实验,将病原体等接种于被检动物脑内,然后观察接种后的各种变化。小鼠脑内给药时,选套有塑料管、针尖露出2mm深的5(1/2)针头,由鼠正中额部刺入脑内,注入药物或接种物。给豚鼠、兔、狗等进行脑内注射时,须先用穿颅钢针穿透颅骨,再用注射器针头刺入脑部,再徐徐注入被检物。注射速度一定要慢,避免引起颅内压急骤升高。
(6)直肠内给药:此种给药方法常用于动物麻醉。家兔直肠内给药时,取灌肠用的胶皮管或用14号导尿管代替。在胶皮管或导尿管头上涂上凡士林,由助手使兔蹲卧于桌上,以左臂及左腋轻轻按住兔头及前肢,以左手拉住兔尾,露出肛门,并用右手轻握后肢,实验者将橡皮管插入家兔肛门内,浓度为7~9cm,如为雌性动物,注意勿误插入阴道(肛门紧接尾根)。橡皮管插好后,将注射器与橡皮管套紧,即可灌注药液。(7)关节腔内给药:此种方法常用于关节炎的动物模型复制。兔给药时,将兔仰卧固定于兔固定台上,剪去关节部被毛.用碘酒或乙醇溶液消毒,然后用手从下方和两旁将关节固定,把皮肤稍移向一侧,在髌韧带附着点处上方约0.5cm处进针。针头从上前方向下后方倾斜刺进,直至针头遇阻力变小,然后针头稍后退,以垂直方向推到关节腔中。针头进入关节腔时,通常可有刺破薄膜的感觉,表示针头已进入膝关节腔内,即可注入药液。
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