《医学免疫学与免疫学检验》:
免疫学技术是提供相应免疫学检验项目、结果及数据的实验应用技术,其发展大致经历了经典、现代和自动化三个阶段。
经典的免疫学技术主要包括免疫凝集试验、免疫沉淀试验、中和试验和补体结合试验等,目前临床常用的主要是免疫凝集试验和免疫沉淀试验。免疫学技术的出现可追溯于19世纪末。1896年Widal和Sicad发现伤寒患者血清可致伤寒沙门菌发生特异的凝集现象,利用该凝集现象可有效地诊断伤寒病,这就是最早用于细菌感染诊断的免疫凝集试验,即著名的肥达试验(Widaltest);1897年Kraus发现细菌培养物滤液与相应抗血清混合时可出现沉淀现象,于是,免疫沉淀试验应运而生。同年Ehrlich在实验中发现毒素和免疫血清(抗毒素)结合后,毒素即失去毒性作用,从而揭示了中和试验。1900年Landesteiner发现了一些人的血浆能使另一些人的红细胞凝集,建立了使用基本的红细胞凝集试验鉴定ABO血型的方法。同年,Bordet建立了补体结合试验,即抗原抗体反应后具有结合和激活补体能力,并可介导细胞或细菌的溶解。
免疫沉淀试验根据反应介质的不同可分为液相免疫沉淀试验和凝胶体免疫沉淀试验,主要包括环状沉淀试验、免疫浊度试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验和免疫电泳等。1902年,Ascoli建立了环状沉淀试验。1905年Bechhold将抗体混溶在明胶中,然后将相应特异性抗原加于其上,发现抗原抗体的特异性结合可在明胶中出现沉淀。1946年,Oudin报道了试管单向免疫扩散试验。1948年,Ouchterlony和Elek报道了平板法双向免疫扩散试验,并用于抗原抗体的鉴定。1965年,Mancini提出平板单向免疫扩散试验,使得以前只能定性的免疫试验能够定量。由Grabar和Williams在1953年首先报道的免疫电泳,将区带电泳和双向免疫扩散相结合,可方便地用于纯化抗原和抗体的分析及正常和异常体液蛋白的识别。此外,免疫电泳技术还包括火箭免疫电泳、对流免疫电泳和免疫固定电泳等。到20世纪70年代,出现了免疫浊度试验用于体液特定蛋白含量的检测,该试验借助特殊仪器可实现自动化分析。
免疫凝集试验包括直接凝集试验、间接凝集试验和自身红细胞凝集试验等。直接凝集试验有玻片法和试管法两种,前者如红细胞ABO血型的玻片鉴定试验,后者有肥大试验和外斐试验及交叉配血凝集试验等。间接凝集试验中曾广泛应用的有间接血凝试验和胶乳凝集试验。自身红细胞凝集试验是20世纪80年代末发展起来的不同于以前的免疫凝集试验的快速检验技术,其最大的优点是采用一种双功能抗体试剂,以患者自身红细胞作为凝集反应指示系统,检测快速方便。
以免疫沉淀和免疫凝集反应为基础的免疫技术,除免疫比浊外,均无需特殊的仪器设备,操作简单方便,有些具体测定方法直至今日在临床应用中仍具有不可替代的一面。但是,其局限性还是很明显的,即检测灵敏度低,除少数外基本上都是定性测定,大大地限制了其在病原体感染诊断和体液中微量生物活性物质测定中的应用价值。
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